Tiempo de prueba de embarazo

Antibuerdo anti-HCG humano IgA (HCG-IGA) ELISA

Las instrucciones del kit para usar este reactivo son solo para uso de la investigación

Propósito: Este kit se utiliza para determinar el contenido de anticuerpos anti-HCG IgA (HCG-IGA) en suero humano, plasma y muestras de líquido relacionadas.

Principio experimental:
Este kit utiliza el método de sándwich de anticuerpos dobles para determinar el nivel de anticuerpo anti-HCG humano IgA (HCG-IGA) en la muestra. Las placas microporosas se recubrieron con anticuerpo de anticuerpos anti-HCG humano purificado (HCG-IGA) para preparar anticuerpos en fase sólida. El anticuerpo anti-HCG IgA (HCG-IGA) se añadió a las microondas recubiertas con MAB a su vez, y luego se marcó con HRP, el anticuerpo antihumano de cabra se une para formar un complejo de anticuerpo con anticuerpo-antigen-enzima. Después de un lavado exhaustivo, el sustrato TMB se agrega para el desarrollo del color. TMB se convierte en azul bajo la catálisis de la enzima HRP y en el amarillo final bajo la acción del ácido. La profundidad de color se correlaciona positivamente con el anticuerpo anti-HCG IgA (HCG-IGA) en la muestra. La absorbancia (valor OD) se midió con un lector de microplacas a una longitud de onda de 450 nM, y la concentración de IgA de anticuerpo anti-HCG humano (HCG-IGA) en la muestra se calculó mediante una curva estándar.

Composición del kit:
Composición del kit 48 Configuración del pozo 96 Instrucciones de almacenamiento de configuración del pozo 1 PARTE 1 PARTE DE SELLA PARTE 2 piezas (48) 2 piezas (96)
Una bolsa sellada y una placa de recubrimiento marcada con enzima 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ Estándar conservado: 54pg / ml 0.5ml × 1 botella 0.5ml × 1 Diluente estándar conservado 1.5ml × 2-8 × × 1 Botella de 1.5 Botella ml × 1 de reactivos marcados con enzimas almacenados a 2-8 ℃ 3 ml × 1 botella de 6 ml × 1 botellas de diluyente de muestra a 2-8 ℃ 3 ml × 1 botella de 6 ml × 1 de almacenamiento de color a 2 -8 ℃ Reactivo A SOLUCIÓN 3 ml × 1 botella 6 ml × 1 botella 2-8 ° C Desarrollador de almacenamiento B Solución 3 ml × 1 botella 6 ml × 1 botella 2-8 ° C Solución de parada de almacenamiento 3 ml × 1 Botella 6 ml × 1 Botella 2: almacene la solución de lavado concentrada a 8 ℃ (20 ml × 20 veces) × 1 botella (20 ml × 30 veces) × 1 botella a 2-8 ℃
1. Suero: la sangre de temperatura ambiente coagula naturalmente durante 10-20 minutos, centrifugados durante unos 20 minutos (2000-3000 rpm). Recoja el sobrenadante con cuidado y centrifugado nuevamente si aparece un precipitado durante el almacenamiento.
2. Plasma: EDTA o citrato de sodio deben seleccionarse como anticoagulante de acuerdo con los requisitos del espécimen, mezclar durante 10-20 minutos y centrifugarse durante aproximadamente 20 minutos (2000-3000 rpm). Recoja el sobrenadante con cuidado. Si se forma un precipitado durante el almacenamiento, debe centrifugarse nuevamente.
3. Orina: recolectada en tubos estériles y centrifugado durante unos 20 minutos (2000-3000 rpm). Recoja el sobrenadante con cuidado. Si se forma un precipitado durante el almacenamiento, centrifuge nuevamente. Pleural y ascitis, implementación de referencia de líquido cefalorraquídeo.
4. Supernatante de cultivo celular: al detectar componentes secretados, recolecte con un tubo estéril. Centrífuga durante unos 20 minutos (2000-3000 rpm). Recoja el sobrenadante con cuidado. Al detectar los componentes dentro de las células, diluya la suspensión celular con PBS (pH7.2-7.4), y la concentración celular alcanzará aproximadamente 1 millón / ml. A través de la congelación y la descongelación repetidas, las células se destruyen y se liberan los componentes intracelulares. Centrífuga durante unos 20 minutos (2000-3000 rpm). Recoja el sobrenadante con cuidado. Si se forma un precipitado durante el almacenamiento, debe centrifugarse nuevamente.
5. Organice la muestra: después de cortar la muestra, pese. Agregue una cierta cantidad de PBS, PH7.4. Congele y ahorre rápidamente con nitrógeno líquido para su uso posterior. Después de que la muestra se derrite, aún mantiene una temperatura de 2-8 ° C. Agregue una cierta cantidad de PBS (pH7.4) y homogeneizar la muestra con un manual o homogeneizador. Centrífuga durante unos 20 minutos (2000-3000 rpm). Recoja el sobrenadante con cuidado. Después de la alícuota, se debe probar una porción y el resto se congela para uso futuro.
6. El espécimen debe extraerse lo antes posible después de la recolección. La extracción debe llevarse a cabo de acuerdo con la literatura relevante. El experimento debe llevarse a cabo lo antes posible después de la extracción. Si la prueba no se puede realizar de inmediato, la muestra se puede almacenar a -20 ℃, pero se debe evitar la congelación y descongelación repetidas.
7. La muestra que contiene NAN3 no se puede detectar porque NAN3 inhibe la actividad de la peroxidasa de rábano picante (HRP).
Pasos:
1. Dilución y carga de productos estándar: establezca 10 pozos estándar en la placa recubierta de enzimas, agregue 100 μl de los productos estándar en el primer y segundo pozos, y luego agregue los productos estándar en el primer y segundo pozos. 50 μl de diluyente, mezcle bien; Luego tome 100 μl del primer pozo y el segundo pozo y agréguelos al tercer y cuarto pozos respectivamente, y luego agregue 50 μl de solución de dilución estándar a los pozos tercero y cuarto respectivamente, mezcle bien y luego tome 50 μl cada uno en el tercer y cuarto pozos y deséchelo, luego agregue 50 μl cada uno a los pozos quinto y sexto, y luego agregue 50ul de la solución de dilución estándar a los pozos quinto y sexto respectivamente, y mezcle bien; Después de mezclar, tome 50 μl de los pozos quinto y sexto y agrégalos a los pozos séptimo y octavo respectivamente. Luego agregue 50 μl de solución de dilución estándar a los pozos séptimo y octavo respectivamente. Tome 50 μl de los ocho pozos y agrégalos al noveno y décimo pozos. Luego agregue 50 μl de la solución de dilución estándar a los pozos noveno y décimo respectivamente. Después de mezclar, tome 50 μl de los pozos noveno y décimo y descarte. (Después de la dilución, el volumen de cada pocillo es de 50 μl, y las concentraciones son 36pg / ml, 24pg / ml, 12pg / ml, 6pg / ml, 3pg / ml).
2. Agregue muestras: configure los pozos en blanco (los pozos de control en blanco no agregan muestras y reactivos enzimáticos, el resto de los pasos son los mismos) y los pozos de muestra a probar. Agregue 40 μl de diluyente de muestra al pozo de muestra de prueba de la placa recubierta de enzimas, y luego agregue 10 μl de la muestra de prueba (la dilución final de la muestra es 5 veces). Agregue la muestra y agregue la muestra al fondo del pozo del microplato, intente no tocar la pared del pozo, agite suavemente para mezclar.
3. Incubación: selle la placa con la película de sellado y incube a 37 ° C durante 30 minutos.
4. Solución de mezcla: diluya 30 veces (20 veces de 48T) Líquido de lavado concentrado con agua destilada 30 veces (20 veces de 48T) y luego use.
5. Lavado: despegara cuidadosamente la película de sellado, deseche el líquido, seque, llene cada pozo con la solución de lavado, permita que se repite durante 30 segundos y deseche, repita 5 veces y se seque.
6. Agregue la enzima: agregue 50 μl de reactivo de etiqueta enzima a cada pozo, excepto en blanco.
7. Incubación: la operación es la misma que 3.
8. Lavado: la operación es la misma que 5.

9. Desarrollo del color: agregue 50 μl de desarrollador A al pozo y luego agregue 50 μl de desarrollador B, mezcle suavemente y muestre a 37 ℃ durante 15 minutos en la oscuridad.
10. Terminación: agregue 50 μl de solución de parada a cada pozo para detener la reacción (en este momento el azul se convertirá en amarillo).
11. Determinación: mida la absorbancia (valor OD) de cada pocillo en secuencia con el aire acondicionado en blanco a cero y longitud de onda de 450 nm. La medición debe realizarse dentro de los 15 minutos después de agregar la solución final.
Precauciones:
1. El kit debe equilibrarse a temperatura ambiente durante 15-30 minutos antes de ser sacado del entorno refrigerado. Si la placa recubierta de la etiqueta de la enzima no está abierta, la tira debe almacenarse en una bolsa sellada.
2. Los cristales pueden precipitarse en el líquido de lavado concentrado, que se puede calentar y disolver en un baño de agua durante la dilución, y los resultados no se verán afectados durante el lavado.
3. La muestra debe usarse en cada paso de suma de muestra, y la precisión debe verificarse regularmente para evitar errores de prueba. Es mejor controlar el tiempo de muestreo en 5 minutos. Si hay muchos especímenes, se recomienda usar una pistola de volea para agregar muestras.

4. Haga una curva estándar al mismo tiempo de cada medida, es mejor hacer un doble agujero. Si el contenido de la sustancia a probar en la muestra es demasiado alto (el valor de OD de la muestra es mayor que el valor de OD del primer pozo del pozo estándar), diluya con ciertas (n veces) de la muestra diluyente y luego determinarlo. Múltiples (× n × 5).
5. La película de sellado se limita al uso único para evitar la contaminación cruzada.
6. Mantenga el sustrato alejado de la luz.
7. Siga estrictamente las instrucciones, y los resultados de la prueba deben ser determinados por el lector de microplacas.
8. Todas las muestras, los líquidos de lavado y varios desechos deben tratarse como agentes infecciosos.
9. Los componentes de diferentes lotes de este reactivo no se mezclarán.
10. Si hay alguna diferencia con el manual de inglés, el manual de inglés prevalecerá.
Cálculo:
Tomando la concentración del estándar como abscisa y el valor de OD como ordenado, dibuje una curva estándar en el papel coordinado y encuentre la concentración correspondiente de la curva estándar de acuerdo con el valor de OD de la muestra; Luego multiplique por el factor de dilución; Calcule la ecuación de regresión lineal de la curva estándar con el valor de OD, sustituya el valor OD de la muestra en la ecuación, calcule la concentración de la muestra y multiplíquela por el factor de dilución para obtener la concentración real de la muestra.

(Esta imagen es solo de referencia)

Rendimiento del kit:
1. El coeficiente de correlación R entre la regresión lineal de la muestra y la concentración esperada es superior a 0,990.
2. El lote y la aprobación serán inferiores al 9% y 11% respectivamente
Rango de examen:
1pg / ml -45pg / ml
Condiciones de almacenamiento y período de validez:
1. Almacene el kit: 2-8 ℃.
2. Validez: 6 meses