Inmunoensayo ligado a enzimas de gonadotropina coriónica porcina β-humana (β-HCG)

Manual de instrucciones de inmunoensayo de gonadotropina coriónica β-humana porcina (β-HCG) Manual de instrucción de inmunoensayo enzimático Este kit es solo para uso de la investigación.
Nombre de la droga:
Nombre genérico: gonadotropina coriónica beta porcina (β-HCG) Elisa Kit

Propósito del uso:
Este kit se usa para la determinación de gonadotropina coriónica β-humana (β-HCG) en suero de cerdo, plasma y muestras de líquido relacionados.

Principio experimental:
Este kit utiliza el método de sándwich de anticuerpos dobles para determinar el nivel de gonadotropina coriónica β-humana porcina (β-HCG) en la muestra. Las placas microporosas se recubrieron con anticuerpo de gonadotropina coriónica β-humana porcina purificada (β-HCG) para producir anticuerpos en fase sólida. Porcine β-human chorionic gonadotropin (β- HCG), then combined with HRP-labeled human villous gonadotropin β (β-HCG) antibody to form an antibody-antigen-enzyme-labeled antibody complex, and after thorough washing, the substrate TMB is agregado para el desarrollo del color. TMB se convierte en azul bajo la catálisis de la enzima HRP y en el amarillo final bajo la acción del ácido. La profundidad del color se correlaciona positivamente con la gonadotropina β β (β-HCG) en la muestra. La absorbancia (valor OD) se midió con un lector de microplacas a una longitud de onda de 450 nM, y la concentración de gonadotropina coriónica porcina β-humana (β-HCG) en la muestra se calculó mediante una curva estándar.

Composición del kit:
1 20 veces la solución de lavado concentrada 30 ml × 1 botella 7 Solución de parada 6 ml × 1 botella
2 reactivo de etiqueta enzimática 6 ml × 1 botella 8 estándar (270 μg / l) 0.5ml × 1 botella
3 pozos con recubrimiento de etiqueta enzimática 12 pozos × 8 tiras 9 diluciones estándar 1.5ml × 1 botella
4 Muestra diluyente 6 ml × 1 botella 10 instrucciones 1 copia
5 Desarrollador Una solución de 6 ml × 1 botella 11 2 película de sellado
6 desarrollador B líquido 6 ml × 1 / botella 12 bolsa sellada 1

Requisitos de muestra:
1. Las muestras se extraen lo antes posible después de la recolección, y la extracción se realiza de acuerdo con la literatura relevante, y los experimentos deben realizarse lo antes posible después de la extracción. Si la prueba no se puede realizar de inmediato, la muestra se puede almacenar a -20 ℃, pero se debe evitar congelamiento y descongelación repetidos
2. Las muestras que contienen NAN3 no se pueden detectar porque NAN3 inhibe la actividad de peroxidasa de rábano picante (HRP).

Pasos:
1. Dilución y carga de productos estándar: establezca 10 pozos estándar en la placa recubierta de enzimas, agregue 100 μl de los productos estándar en el primer y segundo pozos, y luego agregue los productos estándar en el primer y segundo pozos. 50 μl de diluyente, mezcle bien; Luego tome 100 μl del primer pozo y el segundo pozo y agréguelos al tercer y cuarto pozos respectivamente, y luego agregue 50 μl de solución de dilución estándar a los pozos tercero y cuarto respectivamente, mezcle bien y luego tome 50 μl cada uno en el tercer y cuarto pozos y deséchelo, luego agregue 50 μl cada uno a los pozos quinto y sexto, y luego agregue 50ul de la solución de dilución estándar a los pozos quinto y sexto respectivamente, y mezcle bien; Después de mezclar, tome 50 μl de los pozos quinto y sexto y agrégalos a los pozos séptimo y octavo respectivamente. Luego agregue 50 μl de solución de dilución estándar a los pozos séptimo y octavo respectivamente. Tome 50 μl de los ocho pozos y agrégalos al noveno y décimo pozos. Luego agregue 50 μl de la solución de dilución estándar a los pozos noveno y décimo respectivamente. Después de mezclar, tome 50 μl de los pozos noveno y décimo y descarte. (Después de la dilución, el volumen de cada pocillo es de 50 μl, y las concentraciones son 180 μg / L, 120 μg / L, 60 μg / L, 30 μg / L, 15 μg / L).
2. Agregue muestras: configure los pozos en blanco (los pozos de control en blanco no agregan muestras y reactivos enzimáticos, el resto de los pasos son los mismos) y los pozos de muestra a probar. Agregue 40 μl de diluyente de muestra al pozo de muestra de prueba de la placa recubierta de enzimas, y luego agregue 10 μl de la muestra de prueba (la dilución final de la muestra es 5 veces). Agregue la muestra y agregue la muestra al fondo del pozo del microplato, intente no tocar la pared del pozo, agite suavemente para mezclar.
3. Incubación: selle la placa con la película de sellado y incube a 37 ° C durante 30 minutos.
4. Solución de mezcla: diluya 20 veces el líquido de lavado concentrado con agua destilada 20 veces y reserva
5. Lavado: despegara cuidadosamente la película de sellado, deseche el líquido, seque, llene cada pozo con la solución de lavado, permita que se repite durante 30 segundos y deseche, repita 5 veces y se seque.
6. Agregue la enzima: agregue 50 μl de reactivo de etiqueta enzima a cada pozo, excepto en blanco.
7. Incubación: la operación es la misma que 3.
8. Lavado: la operación es la misma que 5.
9. Desarrollo del color: Agregue 50 μl de desarrollador A a cada pozo, y luego agregue 50 μl del desarrollador B, mezcle suavemente y desarrolle color a 37 ℃ en la oscuridad
15 minutos.
10. Terminación: agregue 50 μl de solución de parada a cada pozo para detener la reacción (en este momento el azul se convertirá en amarillo).
11. Determinación: mida la absorbancia (valor OD) de cada pocillo en secuencia con el aire acondicionado en blanco a cero y longitud de onda de 450 nm. La medición debe llevarse a cabo dentro de los 15 minutos después de agregar la solución de parada.

Cálculo:
Tomando la concentración del estándar como abscisa y el valor de OD como ordenado, dibuje una curva estándar en el papel coordinado y encuentre la concentración correspondiente de la curva estándar de acuerdo con el valor de OD de la muestra; multiplicar por el factor de dilución; o use la concentración del estándar calcule la ecuación de regresión lineal de la curva estándar con el valor de OD, sustituya el valor de OD de la muestra en la ecuación, calcule la concentración de la muestra y multiplíquela por el factor de dilución para obtener la concentración real de la muestra.
Precauciones:
1. El kit debe sacar del entorno refrigerado y equilibrarse a temperatura ambiente durante 15-30 minutos antes de su uso. Si la placa recubierta de enzimas se revela después de la apertura, la tira debe almacenarse en una bolsa sellada.
2. Los cristales pueden precipitarse en el líquido de lavado concentrado, que se puede calentar y disolver en un baño de agua durante la dilución, y los resultados no se verán afectados durante el lavado.
3. La muestra debe usarse en cada paso de suma de muestra, y la precisión debe verificarse regularmente para evitar errores de prueba. Es mejor controlar el tiempo de muestreo en 5 minutos. Si hay muchos especímenes, se recomienda usar una pistola de volea para agregar muestras.
4. Haga una curva estándar al mismo tiempo de cada medida, es mejor hacer un doble agujero. Si el contenido de la sustancia a probar en la muestra es demasiado alto (el valor de OD de la muestra es mayor que el valor de OD del primer pozo del pozo estándar), diluya con ciertas (n veces) de la muestra diluyente y luego determinarlo. Múltiples (× n × 5).
5. La película de sellado se limita al uso único para evitar la contaminación cruzada.
6. Mantenga el sustrato alejado de la luz.
7. Siga estrictamente las instrucciones, y los resultados de la prueba deben ser determinados por el lector de microplacas.
8. Todas las muestras, los líquidos de lavado y varios desechos deben tratarse como agentes infecciosos.
9. Los componentes de diferentes lotes de este reactivo no se mezclarán.
10. Si hay alguna diferencia con el manual de inglés, el manual de inglés prevalecerá.

Rango de examen:
10 μg / L -200 μg / L
especificación:
96 Servicios / condiciones de almacenamiento de caja y fecha de vencimiento
1. Almacenamiento del kit :; 2-8 ℃.
2. Validez: 6 meses